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DNA測(cè)序

DNA測(cè)序模仿了在染色體復(fù)制過(guò)程中復(fù)制細(xì)胞DNA的基本過(guò)程，只是該過(guò)程是在試管或微量滴定板中使用最少的一組組分完成的。大多數(shù)DNA測(cè)序技術(shù)都要求有一個(gè)“模板”（即要確定其序列的DNA的生物學(xué)樣品）。“引物”（即與模板區(qū)域互補(bǔ)并能夠延伸的短寡核苷酸）；DNA聚合酶，按照模板鏈的指示，在引物上依次添加結(jié)構(gòu)單元。和四個(gè)構(gòu)建基塊本身。該技術(shù)還必須體現(xiàn)一種方法，通過(guò)該方法可以檢測(cè)添加到底漆中的結(jié)構(gòu)單元的順序。使用選擇的檢測(cè)方法，

大多數(shù)大型DNA測(cè)序設(shè)備都使用熒光染料標(biāo)記和檢測(cè)四個(gè)堿基，并根據(jù)大小通過(guò)毛細(xì)管電泳分離DNA分子，從而可以識(shí)別序列中每個(gè)位置的堿基。更具體地說(shuō)，對(duì)于添加到測(cè)序反應(yīng)中的每個(gè)結(jié)構(gòu)單元的分子中的一小部分，該結(jié)構(gòu)單元經(jīng)過(guò)化學(xué)修飾并用可區(qū)分的染料標(biāo)記，這樣，當(dāng)將修飾的結(jié)構(gòu)單元隨機(jī)添加到從引物，復(fù)制“終止”，結(jié)果測(cè)序反應(yīng)包含大小不同的分子的混合物。由于每個(gè)終止分子的末端均包含染料標(biāo)記的堿基，因此可以確定與模板互補(bǔ)的鏈的序列。



上圖顯示了一組測(cè)序通道，其中電泳用于分離相差一個(gè)堿基的分子。激光檢測(cè)用于識(shí)別每個(gè)位置的堿基。使用“ A”為綠色，“ C”為藍(lán)色，“ G”為黃色，“ T”為紅色的鍵從下至上“讀取”序列。使用測(cè)序儀制造商提供的軟件，可以確定每個(gè)位置的染料信噪比，從而可以“調(diào)用”適當(dāng)?shù)膲A基。堿基順序顯示在“色譜圖”或“跡線(xiàn)”文件中。
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