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凝膠電泳實(shí)驗(yàn)室程序



凝膠電泳是實(shí)驗(yàn)室中用于測(cè)量和分類DNA鏈的一種方法。這是必需的,因?yàn)榧词乖诖蠖鄶?shù)顯微鏡下觀察,正常條件下的DNA仍然很小,無法操作。凝膠電泳實(shí)驗(yàn)室使用相對(duì)簡(jiǎn)單的程序,同樣的基本技術(shù)也可以用于分離單個(gè)蛋白質(zhì)。

凝膠基質(zhì)

要開始凝膠電泳程序,您首先必須創(chuàng)建凝膠。通常,使用稱為瓊脂糖的物質(zhì)將凝膠制成薄片。將瓊脂糖粉放入燒瓶中,然后放入稱為緩沖液的鹽水中。加熱瓊脂糖和緩沖液的混合物,直到兩種物質(zhì)融化在一起,然后倒入成型模具中。然后在凝膠冷卻之前,將一種稱為梳子的裝置放在模具的一端。凝膠冷卻后,將梳子移開,只留下很小的縫隙,可用來固定DNA樣品。

冷卻的瓊脂糖混合物(稱為凝膠基質(zhì))的特殊特性是由于它是用鹽水制成的。通電后,基體將變得導(dǎo)電,從而允許電流沿其長度流動(dòng)。凝膠基質(zhì)的另一個(gè)特殊性能是規(guī)則的微觀孔的存在。這些孔將使DNA鏈穿過凝膠基質(zhì)并促進(jìn)分選過程。電泳室

下一步是創(chuàng)建一個(gè)電泳室。這是一個(gè)矩形的小盒子,兩端的正極和負(fù)極電氣連接。腔室通常是淺的,足夠小以適合桌面,并由有機(jī)玻璃等透明材料制成。

將鹽水倒入電泳室的底部,凝膠基質(zhì)略微浸入該溶液中。鹽水有兩個(gè)作用:幫助電流流動(dòng)和保持凝膠基質(zhì)濕潤。由于DNA由負(fù)電荷推動(dòng),因此放置基質(zhì),使樣品位于負(fù)電連接旁邊。

制備DNA

然后制備DNA樣品。由于幾乎看不到溶液中的DNA,因此將一種稱為加載緩沖液的著色劑添加到每個(gè)單獨(dú)的樣品中。該試劑還可以使DNA溶液增稠,使其流動(dòng)性更小,更可行。使用移液器將DNA溶液樣品轉(zhuǎn)移到凝膠基質(zhì)的每個(gè)交替槽中。在每個(gè)樣品之??間的空槽中,放置一些長度已知的DNA溶液(稱為DNA標(biāo)準(zhǔn)品),用于實(shí)驗(yàn)控制和比較。

打開電源

現(xiàn)在,打開電泳室。在負(fù)電源下,您的DNA樣品將被迫穿過培養(yǎng)室的整個(gè)長度。小DNA鏈將更快地通過凝膠基質(zhì),并且在短時(shí)間內(nèi)它們會(huì)與較長,較慢的鏈分離。著色劑中的染料可讓您追蹤DNA。您將看不到DNA的各個(gè)鏈,但是相同長度的鏈會(huì)聚在一起。

最后步驟

分離出DNA后,從電泳室中取出基質(zhì)。然后將DNA染色,以便于測(cè)量和檢查。


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